在色譜柱清洗開始和結(jié)束時(shí)，都應(yīng)按照色譜柱檢測(cè)報(bào)告中所列的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)色譜柱測(cè)量柱效、容量因子等，以確保色譜柱得到清洗，柱效得到提高。

在所有情況下(除非另有說(shuō)明)，一般使用40-60倍柱體積的溶劑。需確保色譜柱上沒有緩沖液或樣品，且清洗前色譜柱中的殘留溶劑應(yīng)與第一種清洗溶劑混溶。清洗后，確保流動(dòng)相可與色譜柱中的殘留溶劑混溶。

正相色譜柱

1. 用四氫呋喃沖洗

2. 用甲醇沖洗

3. 用四氫呋喃沖洗

4. 用二氯甲烷沖洗

5. 用無(wú)苯正己烷沖洗

反相色譜柱

1. 用 HPLC 級(jí)水沖洗，在沖洗過程中注入4等分共 200μL 的 DMSO

2. 用甲醇沖洗

3. 用氯仿沖洗

4. 用甲醇沖洗

陰離子交換色譜柱

1. 用 HPLC 級(jí)水沖洗

2. 用 50mM 到 1M 的適當(dāng)緩沖液進(jìn)行梯度沖洗

3. 用 HPLC 級(jí)水沖洗

4. 用甲醇沖洗

5. 用氯仿沖洗

陽(yáng)離子交換色譜柱

1. 用HPLC級(jí)水沖洗，在沖洗過程中注入 4 等分共 200μL 的 DMSO

2. 用四氫呋喃沖洗

蛋白體積排阻色譜柱

從蛋白體積排阻填料中移除污染物有兩種清洗/再生方法

弱保留蛋白

1. 用30mL 0.1M 磷酸鹽緩沖液 (pH 3.0) 沖洗

強(qiáng)保留蛋白

2. 用 100% 水到 100% 乙腈梯度沖洗60分鐘

多孔石墨碳色譜柱

多孔石墨碳有四種清洗或再生方法。使用哪種方法取決于分析物以及對(duì)應(yīng)的流動(dòng)相

1.酸/堿清洗：用水相比例較高的流動(dòng)相分析離子化合物時(shí)

1.1 反接色譜柱

1.2 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗

1.3 用 50mL 包含 0.1% 三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃:水 (1:1) 沖洗

1.4 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗

1.5 用 70 倍柱體積的 THF 沖洗

1.6 用甲醇/水 (95:5) 沖洗以重新平衡

1.7 重新倒轉(zhuǎn)色譜柱方向

2.強(qiáng)有機(jī)溶劑清洗

用水相比例較高的流動(dòng)相分析極性和/或離子化化合物時(shí)

2.1 用 50mL 丙酮沖洗

2.2 用 120mL 二丁醚沖洗

2.3 用 50mL 丙酮沖洗

2.4 用水溶液流動(dòng)相沖洗直到達(dá)到平衡

3．正相模式的清洗

適用于使用正相流動(dòng)相進(jìn)行分析的應(yīng)用。

3.1 用 50mL 二氯甲烷沖洗

3.2 用 50mL 甲醇沖洗

3.3 用 50mL 水沖洗

3.4 用 50mL 0.1M 鹽酸沖洗

3.5 用 50mL 水沖洗

3.6 用 50mL 甲醇沖洗

3.7 用 50mL 二氯甲烷沖洗

3.8 用流動(dòng)相沖洗直到達(dá)到平衡

4. 移除 TFA 和 DEA

TFA 和DEA可能吸附于多孔石墨碳表面；在流動(dòng)相中使用這些添加劑后，應(yīng)對(duì)色譜柱進(jìn)行再生以確保始終實(shí)現(xiàn) Hypercarb的原始選擇性和最佳性能。

再生程序如下：

4.1 移除 TFA：用 70 倍柱體積的 THF 沖洗。

4.2 移除 DEA：將柱溫設(shè)為75℃，然后用120倍柱體積的ACN 沖洗。

帶金屬對(duì)離子的聚合物介質(zhì)色譜柱

對(duì)于帶金屬對(duì)離子的聚合物柱，有三種再生方法。下表詳細(xì)列出了各種再生方法。

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